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           技術文章
          細胞免疫組化參考實驗步驟
          作者:江蘇鎮江厚普生物科技有限公司  來源:抗體技術部  發表時間:[2011-11-5]  點擊:3589

          1. 細胞爬片;

          2. PBS清洗標本 3次,各1 min。

          3. 冷丙酮4固定15min(或用4%多聚甲醛室溫固定10~20min);

          4. 空氣干燥5min,PBS漂洗3min,3次;

          5. 細胞通透:0.5% Triton X-100(溶于PBS)通透細胞,室溫15~30min(丙酮固定法不用此步驟);

          6. PBS漂洗2次,每次5min;

          7. 3% H2O2去離子水室溫孵育10min,PBS洗;

          8. 正常山羊血清封閉,37孵育10~20min,甩掉封閉液,勿洗;

          9. 加適當比例的一抗工作液孵育,4過夜或37 1~2h;

          10.  PBS漂洗2次,每次5min;

          11. 加入酶標二抗工作液,37,30-60min;

          12. PBS漂洗2次,每次5min;

          13. DAB顯色劑顯色(或AEC顯色),鏡下觀察結果,適時終止;

          14. 蘇木素輕度復染;

          15. 脫水透明。

          16. 封片,中性樹膠封片。

          光學顯微鏡觀察,拍片。圖象評分。

           

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