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           產品專欄
          人脂蛋白磷脂酶A2酶聯免疫試劑盒說明書
          作者:江蘇鎮江厚普生物科技有限公司  來源:  發表時間:[2011-9-29]  點擊:1497

          人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

          使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理,來檢測人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2),只能用于研究用途,不得用于醫學診斷。

          用    途: 用于人血清、血漿及相關液體樣本中脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的測定。

          工作原理

          本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的水平。向預先包被了人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)單克隆抗體的酶標孔中加入脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2),溫育;洗滌后,加入HRP標記過的脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)抗體。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人脂蛋白磷脂酶A2 (Lp-PLA2)的濃度呈正相關。

          試劑盒組成

          1

          標準品(48μg/L)

          0.5ml

          7

          顯色劑A液

          6ml

          2

          標準品稀釋液

          3ml

          8

          顯色劑B液

          6ml

          3

          酶標包被板

          12孔×8條

          9

          終止液

          6ml

          4

          酶標試劑

          6ml

          10

          說明書

          1份

          5

          30倍濃縮洗滌液

          20ml

          11

          封板膜

          2張

          6

          樣品稀釋液

          6ml

          12

          密封袋

          1個

          需要而未提供的試劑和器材

          1.   37℃恒溫箱

          2.   標準規格酶標儀

          3.   精密移液器及一次性吸頭

          4.   蒸餾水

          5.   一次性試管

          6.   吸水紙

          注意事項

          1.   從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

          2.   各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。

          3.   建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。如標本中待測物質含量過高,請先用PBS稀釋一定倍數(n倍)后再按說明書操作進行測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

          4.   嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

          5.   為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

          6.   不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

          7.   底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

          洗板方法

          手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。

          自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

          標本要求

          1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

          操作程序

          1.   標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋):

          24μg/L  (5號標準品) 120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液

          12μg/L  (4號標準品) 120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液

          6μg/L    (3號標準品) 120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液

          3μg/L    (2號標準品) 120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液

          1.5μg/L (1號標準品) 120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液

          2.   分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入稀釋好的標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。輕輕晃動混勻,37℃溫育30分鐘。  

          3.   棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。

          4.   每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育30分鐘。 

          5.   棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。

          6.   每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。

          7.   取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

          8.   測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

          9.   根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。

          操作程序總結:

          準備試劑,樣品和標準品

          加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘

          洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘

          洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色10分鐘

          加入終止液

          15分鐘之內讀OD值

          計算

          檢測范圍:1μg/L→30μg/L

          規格:    96T/盒

          保存:    2-8℃

          有效期:  6個月(2-8℃)。

           

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